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電穿孔法轉(zhuǎn)染如此“萬能”,為什么還要用其他方法?
發(fā)布時間: 2021-10-09 點擊次數(shù): 1893次同學(xué)們在進行轉(zhuǎn)染時,肯定被各種各樣的轉(zhuǎn)染試劑挑花了眼吧。商業(yè)化的轉(zhuǎn)染試劑通常針對多重細胞類型、不同的核酸和各種特定的用途,也就是說,你要從種類繁多的試劑中挑選適合你的。
這時候,電穿孔法轉(zhuǎn)染就進入了我們的視野。
電穿孔法轉(zhuǎn)染原理是通過脈沖電場,使得細胞膜上產(chǎn)生小孔,通透性被暫時的提高。周圍的小分子穿過小孔,擴散到細胞內(nèi)。理論上說,電穿孔法轉(zhuǎn)染是可以對任何細胞進行轉(zhuǎn)染,可以轉(zhuǎn)染DNA、RNA、蛋白、糖類等,也不需要特殊的試劑。
但為什么還是有很多實驗者選擇了脂質(zhì)體介導(dǎo)法等方案呢?原因如下
1、電穿孔法雖然不需要特殊試劑,但需要購買昂貴的電轉(zhuǎn)儀。
2、電穿孔法轉(zhuǎn)染會殺死細胞,因此需要較多的細胞和外源分子。
3、電穿孔法對實驗者的操作水平要求較高。過低的電場強度、過長的電脈沖時間,會裂解細胞;電壓過低,過短的電脈沖時間則會降低轉(zhuǎn)染效率。
因此,電穿孔法不是真正的“萬能",實驗上也需要多學(xué)習(xí)、優(yōu)化。
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