細(xì)胞培養(yǎng)需要無菌技術(shù)。

什么是無菌技術(shù)？它和普通的實(shí)驗(yàn)操作有什么區(qū)別？

首先，無菌技術(shù)是通過制定一個(gè)嚴(yán)格的操作規(guī)范來約束每個(gè)人做實(shí)驗(yàn)的行為規(guī)范，從而排除潛在的污染可能。其原則就是在外部環(huán)境的微生物和細(xì)胞之間建立起一道屏障。

這道屏障有兩層含義：

1.讓細(xì)胞從物理上和外部非無菌的物品隔絕，不讓它們直接接觸

2.設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)操作時(shí)，所有步驟不能讓細(xì)胞和外部非無菌環(huán)境建立直接聯(lián)系

說白了，就是從各個(gè)環(huán)節(jié)、細(xì)節(jié)上去盡力做到?jīng)]有過失。

實(shí)驗(yàn)操作臺(tái)面

在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)操作，操作臺(tái)面的使用有以下注意事項(xiàng)：

1 用之前，無論上一個(gè)使用者是否有擦拭臺(tái)面，你都需要重新擦拭一次，并使用70%乙醇消毒臺(tái)面，再使用紫外照射消毒30分鐘以上；

2 操作臺(tái)面內(nèi)只放和本次實(shí)驗(yàn)操作有關(guān)系的實(shí)驗(yàn)工具，放置時(shí)按照分類和使用習(xí)慣來合理放置，切勿堆放在一起，也不要太靠近外部邊緣。

3.實(shí)驗(yàn)過程中，如果培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、多孔板已打開蓋子，那么手部和任何其他物品都不應(yīng)該越過敞口上方，否則將可能把微生物帶入器皿內(nèi)；

4.所有的實(shí)驗(yàn)操作，都應(yīng)該在你的視野范圍內(nèi)進(jìn)行，也就是你在操作時(shí)，必須能看到實(shí)驗(yàn)工具的整體，這是為了避免因盲區(qū)導(dǎo)致的實(shí)驗(yàn)工具的末端觸碰到其他物品、臺(tái)面或你的身體部位，導(dǎo)致污染；

5.在實(shí)驗(yàn)過程中，如果出現(xiàn)試劑、培養(yǎng)物液體滴在臺(tái)面，應(yīng)停止當(dāng)前操作，并立即用70%乙醇擦拭臺(tái)面；

6.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，所有實(shí)驗(yàn)物品都應(yīng)搬離臺(tái)面，并再次擦拭清潔，最后用70%乙醇消毒；

個(gè)人衛(wèi)生

1 穿實(shí)驗(yàn)服、佩戴口罩和外科滅菌手套，長頭發(fā)的同學(xué)應(yīng)把頭發(fā)扎在腦后，佩戴的手套的上緣應(yīng)該與實(shí)驗(yàn)服的袖口重疊在一起，就是把袖口末端塞進(jìn)手套內(nèi)；

2 手套在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中，不管是否有移出生物安全柜以外的范圍，都應(yīng)間隔一段時(shí)間就使用70%乙醇擦拭一次；

3 如果感染了疾病，例如感冒，則應(yīng)該暫緩實(shí)驗(yàn)或佩戴面罩后再進(jìn)入細(xì)胞間做實(shí)驗(yàn)；

4 實(shí)驗(yàn)過程中，如果實(shí)驗(yàn)操作者和培養(yǎng)物之間有玻璃間隔，可以說話，但應(yīng)該盡量少說話。

試劑和培養(yǎng)基

1 從外部采購的試劑和培養(yǎng)基，如果有外包裝，包括紙盒、薄膜等，都應(yīng)該在細(xì)胞間外去除后，再使用70%乙醇消毒外表面后才放入操作臺(tái)面；

2 如果實(shí)驗(yàn)過程中，這些試劑、培養(yǎng)基曾拿出過生物安全柜以外的范圍，例如放入了冰箱、培養(yǎng)箱、水槽等，需要重新擦拭干凈后用70%乙醇消毒，然后才可以再次放入操作臺(tái)面內(nèi)。

培養(yǎng)物

1. 在每一次實(shí)驗(yàn)之前，先用肉眼觀察細(xì)胞是否正常沒有污染，并在顯微鏡下再次檢查確認(rèn)，如果污染則應(yīng)停止該次實(shí)驗(yàn)并清理掉細(xì)胞；細(xì)胞拿進(jìn)生物安全柜之前，同樣需要用70%乙醇擦拭培養(yǎng)器皿外表面；

2 每一批次的細(xì)胞，在培養(yǎng)周期內(nèi)，都應(yīng)該取一部分出來單獨(dú)使用無抗生素的（血清）細(xì)胞培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)檢測，判斷其是否有潛在污染，這是為了排除抗生素對污染的干擾。

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